Las 127 hermandades filiales participan desde aproximadamente las 00.25 en el Santo Rosario de la romería, que se realiza a pie por las calles de la aldea de El Rocío partiendo desde la Plaza de Doñana, bajo la presidencia de la Hermandad Matriz de Almonte.
El rezo del Rosario es el acto previo a la salida procesional de la Virgen del Rocío, que se producirá cuando el Simpecado de la Hermandad Matriz regrese hasta el altar de la Blanca Paloma -en 2019 y 2020 fueron alrededor de las 3:00 horas- y los almonteños protagonicen el tradicional 'salto de la reja'.
Ese acto supone la bajada de la Virgen de su presbiterio y el inicio de su paseo por las calles de la aldea para encontrarse con sus fieles y agradecerle su presencia y participación en la romería.
Para participar en el Rosario -que tiene una duración de unas tres horas-, las filiales comenzaron a aproximarse a la Plaza de Doñana alrededor de las 23.00 horas con sus simpecados y entre bengalas de colores, dando a la aldea una luz y un color singular.
El rezo del Santo Rosario, que este año está acompañado en el canto por el coro de la Hermandad del Rocío de Almería, tiene en las puertas de la ermita uno de sus momentos más emotivos, pues ante ellas pasan todos y cada uno de los simpecados de las filiales en un desfile que se desarrolla por orden inverso de antigüedad, y que han abierto, por tanto, las dos hermandades incorporadas más recientemente, la de Montequinto (Sevilla) y Torremolinos (Málaga).
Esto es así desde el 2011, año en el que la Matriz recuperó una vieja tradición; tras su paso ante las puertas del Santuario las filiales vuelven a sus casas oficiales para prepararse para la visita de la Virgen del Rocío.